La electroforesis en gel, son un grupo de técnicas empleadas con el fin de separar moléculas, basándose en propiedades de las mismas como lo son el tamaño, la forma y el punto isoeléctrico, en este proceso las moléculas se separan debido la diferencia de su carga neta. Por consiguiente, la electroforesis en gel es muy eficaz para separar mezclas complejas de proteínas u otras moléculas.
El aparato de la electroforesis de gel incluye varios componentes, cada uno de dichos componentes, posee un papel clave para el proceso que se produce cuando se ejecuta fragmentos de ADN o proteínas en el gel. Entre los que se encuentran:
Tinción y visualización
Los geles son típicamente teñidos con una sustancia química llamada bromuro de etidio, que puede ser insertado entre las dos cadenas en un fragmento de ADN de doble hebra. Flouresce brillantemente cuando es enlazado al AND, así exponiendo el gel a la luz ultravioleta, hará que las bandas de fragmentos de ADN sean visibles. Debido a que la luz UV es dañina para los ojos de los humanos, el gel se examina generalmente en una caja de luz ultravioleta llamado transiluminador. El gel UV iluminada típicamente, es fotografiado por lo que los resultados pueden analizarse posteriormente.
Gel
El gel es usado para electroforesis de fragmentos de ADN, está hecho de agarosa, un polímero de almidón. Preparar el gel es simplemente una cuestión de mezclar polvo de agarosa con un tapón químico y calentarlo en el microondas; el gel se puede verter y dejar enfriar. Proteínas son por lo usual, separadas en un gel de poliacrilamida. Este gel se prepara a partir de un monómero de acrilamida, con la adición de amonio persulfato y tetramethylenedimine a la acrilamida, la mezclar provoca que la acrilamida polimerice y endurezca.
Tanque
El tanque está hecho de plástico; contiene una cama de gel en el que se dispone el gel. En cualquier lado son dos baflesde plástico que mantenga el gel en su lugar mientras está enfriando. Una vez que el gel se ha solidificado, el tanque está lleno de tampón para que el nivel de buffer se encuentre justo por encima del gel; la tapa de la cámara de electroforesis contiene los electrodos que la fuente actual de la fuente de energía, que mantiene un voltaje determinado. Una vez que está encendido los fragmentos de ADN cargados negativamente comenzaran a migrar hacia el electrodo positivo (ánodo). La electroforesis de proteínas es similar pero el gel está dirigido verticalmente.
Peine y micropipeta
Al verter el gel, se utiliza un peine de plástico para crear pequeñas depresiones cuadradas llamadas pozos- en él. Las muestras de ADN se cargarán más adelante en estos pozos utilizando una micropipeta. Como pipetas más grandes, una pipeta está diseñada para tomar y distribuir precisamente calibrado de líquido. Las micropipetas son por lo general ajustables para que el usuario pueda determinar cuántos microlitros que se desean agregar. La solución se encuentra en la punta de la micropipeta plástica, que se utiliza generalmente solamente una vez antes de ser desechado para evitar la contaminación.
La electroforesis en gel se emplea en múltiples campos de la ciencia, como en la genética, en la biología y bioquímica molecular, así como en la medicina forense.
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