La spectrophotométrie quantifie la concentration d’une substance spécifique présente dans un échantillon en comparant la quantité de lumière qui pénètre dans un échantillon par rapport à la quantité de lumière qui quitte l’échantillon à une longueur d’onde spécifique. Il peut être utilisé théoriquement pour mesurer toute substance qui absorbe la lumière.
Qu’est-ce qu’un spectrophotomètre ?
Un spectrophotomètre est un instrument utilisé pour mesurer, en fonction de la longueur d’onde, la relation entre des valeurs de même grandeur photométrique par rapport à deux faisceaux de rayonnement. Il existe différents types de spectrophotomètres, qui peuvent être à absorption atomique ou massique.
Ces appareils ont la capacité de projeter un faisceau de lumière monochromatique à travers un échantillon et de mesurer la quantité de luminosité absorbée par cet échantillon. Grâce à cela, le spectrophotomètre peut nous fournir des informations sur la nature de la substance dans l’échantillon, ainsi qu’indiquer indirectement quelle quantité de la substance qui nous intéresse sera présente dans l’échantillon.
Les spectrophotomètres fonctionnent en isolant la lumière de longueurs d’onde spécifiques de la lumière blanche. Un spectrophotomètre divise la lumière en son spectre, à l’aide d’un réseau coloré ou d’un système similaire. Ensuite, un ensemble de capteurs lit chaque section du spectre, produisant les informations spectrales.
Certains des composants essentiels du spectrophotomètre sont, par exemple, la source lumineuse qui éclaire un certain échantillon et qui doit répondre à une série de conditions telles que, par exemple, l’adressabilité, la stabilité, la distribution continue d’énergie spectrale. Les sources habituellement utilisées sont la lampe au tungstène ou la lampe à arc au xénon. De son côté, le monochromateur isole le rayonnement de la longueur d’onde souhaitée qui est réfléchi par l’ensemble. Le détecteur, quant à lui, est celui qui identifie le rayonnement et dans lequel on distingue deux modes : ceux qui répondent aux photons et ceux qui répondent à la chaleur.
Quelles considérations devez-vous prendre en compte ?
La spectrophotométrie varie principalement en fonction du type de lumière mesurée et du choix de la longueur d’onde de l’instrument. La lumière UV/Vis (ultraviolet/visible) ou la lumière fluorescente peuvent être utilisées en spectrophotométrie. Une longueur d’onde spécifique de la lumière UV / Vis peut être utilisée pour déterminer directement la concentration d’une substance, ou l’émission de lumière fluorescente peut être utilisée pour déterminer indirectement la concentration d’une molécule spécifique.
Utilisations du spectrophotomètre
Les spectrophotomètres sont largement utilisés dans les sciences biomédicales et la recherche en sciences de la vie, y compris la recherche universitaire et industrielle. Les utilisations typiques du spectrophotomètre sont les mesures de la densité des acides nucléiques, des protéines et des bactéries.
Cependant, les spectrophotomètres sont également largement utilisés dans diverses industries, notamment la biotechnologie, les tests diagnostiques et cliniques, la recherche sur les médicaments, la recherche pharmaceutique, le génie chimique, la science des matériaux et la recherche agricole.
La spectrophotométrie quantifie la concentration de compositions à une ou plusieurs longueurs d’onde. Ainsi, le chercheur choisirait entre les méthodes de classification en fonction du type d’informations qu’il souhaite obtenir de la substance.
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