L’électrophorèse sur gel est une technique de laboratoire utilisée en génétique pour séparer des mélanges contenant de l’ADN, de l’ARN et d’autres protéines en fonction de leur taille et de leur charge moléculaire respectives. L’électrophorèse sur gel peut être de deux méthodes différentes : l’électrophorèse sur gel horizontale et l’électrophorèse sur gel verticale.
Quel est le principe de l’électrophorèse et sa relation avec le poids moléculaire ?
L’ADN, l’ARN ou les protéines qui doivent être séparés dans cette méthode sont passés à travers un gel contenant de petits pores. Les molécules sont entraînées à travers le gel par un champ électrique. Les molécules traversent les pores du gel, et la vitesse de déplacement est inversement proportionnelle à leurs longueurs respectives. Par conséquent, les molécules avec une taille moléculaire inférieure se déplaceront plus rapidement que les molécules avec un poids moléculaire plus élevé. Le champ électrique est généré par la différence de charge aux deux extrémités du gel. Une extrémité contient une charge positive et l’autre extrémité contient une charge négative.
Dans l’électrophorèse sur gel horizontale, le gel est présent dans une orientation horizontale et est immergé dans un tampon fonctionnant en continu qui est présent dans la boîte de gel elle-même. En électrophorèse verticale sur gel, le système tampon est orienté verticalement et discontinu avec deux chambres présentes en haut et en bas avec une cathode et une anode, respectivement. C’est la principale différence entre l’électrophorèse sur gel horizontale et verticale.
Électrophorèse horizontale sur gel
L’électrophorèse horizontale sur gel utilise la théorie de base pour la séparation des molécules d’ADN, d’ARN ou de protéines en fonction de leur taille et de leur charge moléculaire respectives. Dans cette technique, le gel est présent dans une orientation horizontale et est immergé dans un tampon qui est continu. Le gel d’agarose est utilisé pour séparer la boîte de gel en deux compartiments.
Dans l’électrophorèse horizontale sur gel, l’acrylamide ne peut pas être utilisé car la boîte de gel est exposée à l’oxygène. En raison de la présence d’oxygène, la polymérisation de l’acrylamide est inhibée, ce qui interfère avec la formation de gel. L’électrophorèse horizontale sur gel est une méthode sans effort utilisée dans la séparation de l’ADN et de l’ARN.
Électrophorèse verticale sur gel
Cette technique utilise un tampon discontinu. Une cathode est située dans la chambre supérieure et l’anode est située dans la chambre inférieure. Les électrodes présentes dans chaque compartiment fournissent le champ électrique requis. Une fine couche de gel est versée entre les deux plaques de verre montées. Par conséquent, la partie supérieure du gel est immergée dans la chambre supérieure et la partie inférieure du gel est immergée dans la chambre inférieure.
Dans l’électrophorèse verticale sur gel, le tampon ne traverse que le gel. Le gel d’acrylamide peut être utilisé car les compartiments ne sont pas exposés à l’oxygène de l’air. En raison de la taille plus petite des pores du gel d’acrylamide, une séparation précise peut être obtenue avec une résolution plus élevée.
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