Un fluoromètre est un instrument utilisé par la technique pour la quantification fluorométrique, car il permet de quantifier, détecter et surveiller les analytes et leurs réactions en laboratoire, comme la chlorophylle. Cet équipement mesure l’intensité du signal fluorescent (fluorescence) à partir de colorations adhérant à des molécules biologiques ainsi qu’à des molécules fluorescentes naturelles basées sur des longueurs d’onde d’excitation (Ex) et d’émission (Em).

La fluorescence est définie comme un type de luminescence qui se produit dans des substances gazeuses, liquides ou solides capables d’absorber des rayonnements électromagnétiques (par exemple, la lumière) et d’émettre une partie de cette énergie sous forme de rayonnement d’une longueur d’onde différente de celle absorbée.

Caractéristiques d’un fluoromètre

Un fluoromètre est un instrument de laboratoire qui se caractérise par l’utilisation de filtres optiques pour isoler la lumière incidente et la lumière fluorescente, et mesure la capacité de l’échantillon à absorber la lumière à une longueur d’onde et émettent de la lumière à une longueur d’onde plus longue. Ce sont des dispositifs très sensibles, et leurs filtres optiques, sont généralement économiques et faciles à changer. Cela rend les fluoromètres très utiles dans la recherche scientifique et expérimentale, ainsi qu’à des fins académiques.

Dans ces instruments, une source de rayonnement (lumineuse) émet une lumière d’une longueur d’onde d’excitation pour le composé à mesurer ou à analyser. L’excitation du composé à analyser se produit par l’utilisation des filtres optiques, ceux-ci fonctionnent en bloquant d’autres longueurs d’onde et transmet la longueur d’onde appropriée pour produire l’excitation du composé. La lumière générée par la source de rayonnement passe à travers l’échantillon à mesurer, et une certaine quantité de longueur d’onde est absorbée, tandis qu’elle est ensuite émise à une longueur d’onde plus grande. Cette lumière émise est mesurée par un détecteur.

Qu’est-ce que la chlorophylle ?

La chlorophylle, pigment vert utilisé par les plantes et les algues pour capter la lumière du soleil, émet une lumière rouge faible pendant la photosynthèse. Phénomène connu sous le nom de « fluorescence de la chlorophylle », imperceptible pour l’oeil humain, mais qui fournit des informations sur le taux instantané de photosynthèse, ce qui fournit une « porte optique » qui suit l’état fonctionnel et de santé de la plante.

L’énergie lumineuse absorbée par les molécules de chlorophylle dans la feuille a trois destinations possibles : La plus grande partie sera utilisée en photosynthèse (énergie photochimique). Une petite partie de l’énergie, qui ne peut pas être utilisée en photosynthèse, se dissipe sous forme de chaleur ou peut être réémise sous forme de lumière (sous forme de fluorescence) afin que l’excès d’énergie ne nuise pas aux photosystèmes. La quantité d’énergie émise par fluorescence est très faible.

Mesure de la fluorescence de la chlorophylle

La fluorescence de la chlorophylle est aujourd’hui considérée comme un outil très utile pour évaluer l’état photosynthétique et détecter les changements physiologiques et environnementaux des plantes. La fluorescence émise par la chlorophylle représente entre 1 et 3 % de la lumière totale absorbée. Le spectre de la fluorescence est différent de celui de la lumière absorbée, avec un pic d’émission à une longueur d’onde supérieure, le spectre d’émission de la chlorophylle montre un pic à 682 nm, de sorte que la fluorescence peut être quantifiée en exposant la feuille à une longueur d’onde connue, inférieure à 670 nm. Et ensuite, en mesurant la lumière émise à une plus grande longueur d’onde, entre 670 et 750 nm.

La mesure de la fluorescence de la chlorophylle est une technique clé pour l’évaluation de la physiologie végétale, car elle fournit des informations essentielles sur l’état du photosystème II. Elle permet ainsi d’évaluer les paramètres de croissance et de développement ; détection des situations de stress ; les réactions des plantes aux changements environnementaux ; variation génétique et diversité écologique. Ce sont des mesures rapides et très efficaces qui ne détruisent pas la plante et qui informent les changements produits au niveau de la feuille.

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• Deux canaux optiques : équipés de deux canaux fluorescents pour l’acide nucléique, quantification de protéines en une détection.
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