La electroforesis en gel es una técnica de laboratorio utilizada en genética para separar mezclas que contienen ADN, ARN y otras proteínas de acuerdo con su respectiva carga y tamaño molecular. La electroforesis en gel puede ser de dos métodos diferentes: electroforesis en gel horizontal y electroforesis en gel vertical.
¿Cuál es el principio de la electroforesis y su relación con el peso molecular?
El ADN, el ARN o las proteínas que deben separarse en este método se ejecutan a través de un gel que contiene pequeños poros. Las moléculas son conducidas a través del gel por un campo eléctrico. Las moléculas pasan a través de los poros del gel, y la velocidad del movimiento es inversamente proporcional a sus respectivas longitudes. Por lo tanto, las moléculas con un tamaño molecular más bajo se moverán más rápido que las moléculas con un peso molecular más alto. El campo eléctrico es generado por la diferencia de carga en dos extremos del gel. Un extremo contiene una carga positiva, y el otro extremo contiene una carga negativa.
En la electroforesis de gel horizontal, el gel está presente en una orientación horizontal y se sumerge en un tampón de funcionamiento continuo que está presente dentro de la propia caja de gel. En la electroforesis en gel vertical, el sistema de tampón está orientado verticalmente y es discontinuo con dos cámaras presentes en la parte superior e inferior con un cátodo y un ánodo, respectivamente. Esta es la diferencia clave entre la electroforesis horizontal y vertical en gel.
Electroforesis horizontal en gel
La electroforesis horizontal en gel utiliza la teoría básica para la separación de moléculas de ADN, ARN o proteínas según su respectivo tamaño molecular y carga. En esta técnica, el gel está presente en una orientación horizontal y se sumerge en un tampón que es continuo. El gel de agarosa se utiliza para separar la caja de gel en dos compartimentos.
En la electroforesis horizontal en gel, la acrilamida no puede utilizarse ya que la caja de gel está expuesta al oxígeno. Debido a la presencia de oxígeno, se inhibe la polimerización de la acrilamida, lo que interfiere con la formación del gel. La electroforesis horizontal en gel es un método sin esfuerzo que se utiliza en la separación de ADN y ARN.
Electroforesis vertical en gel
Esta técnica utiliza un tampón discontinuo. Un cátodo está ubicado en la cámara superior, y el ánodo está ubicado en la cámara inferior. Los electrodos presentes en cada compartimento proporcionan el campo eléctrico requerido. Una capa delgada de gel se vierte entre las dos placas de vidrio montadas. Por lo tanto, la parte superior del gel se sumerge en la cámara superior, y la parte inferior del gel se sumerge en la cámara de la parte inferior.
En la electroforesis en gel vertical, el tampón solo fluye a través del gel. Puede utilizarse gel de acrilamida ya que los compartimentos no están expuestos al oxígeno atmosférico. Debido al tamaño de poro más pequeño del gel de acrilamida, se puede lograr una separación precisa con una resolución más alta.
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