Es un microscopio que nos permite observar las imágenes convencionales y los contrastes con fluorescencia, cabe destacar, que se utiliza un microscopio óptico tradicional, pero con pequeñas especificaciones que permitan adaptarle el sistema óptico por fluorescencia; esta característica se le denomina “EPI fluorescencia” porque se inserta por encima del sistema óptico u objetivos de aumento, trabajando por reflexión lumínica.
El microscopio convencional debe poseer ciertas características para que la adaptación se posible, de lo contrario cuando se requiera la adaptación es posible que no sea factible; para evitar esto no dude en consultar nuestra gama de microscopios a través del siguiente enlace AQUI nuestros asesores lo atenderán; los accesorios que requiere una EPI fluorescencia consta de un una fuente de alimentación eléctrica, un portalámparas que incluye una lámpara de vapor de mercurio, un sistema colector de luz y unos filtros de fluorescencia específicos.
Ventajas de la microscopia de fluorescencia.
Al momento que se inicio la microscopia de fluorescencia se inició la revolución en la biología celular, este permitió observar las imágenes de células vivas, marcado múltiple de orgánulos individuales y complejos macromoleculares a través de sondas fluorescentes sintéticas y genéticamente codificadas; mediante esta técnica podemos obtener imágenes de la distribución de una sola especie molecular.
A través de la microscopia de fluorescencia se amplía el ámbito de aplicación del campo de la microscopia, usándolo para controlar la ubicación de los componentes intracelulares marcados con fluoróforos específicos. Así como sus coeficientes de difusión asociados, características de transporte e interacción con otras biomoléculas. También para observar las variables ambientales localizadas, permite investigar el pH, la viscosidad, el índice de refracción; las concentraciones iónicas, el potencial de membrana y la polaridad del disolvente en células y tejidos vivos.
Cómo funciona un microscopio de fluorescencia.
Lo primero es preparar la muestra con una sustancia fluorescente que tiene por nombre fluoróforo, luego esta será iluminada a través del lente con una luz de energía alta. La luz será absorbida por el fluoróforo y provocará la emisión de luz con baja energía y una larga longitud de onda. Esta luz fluorescente puede ser separada de la radiación que la rodea utilizando filtros diseñados para esa longitud de onda en específico, permitiendo que el observador visualiza sólo aquello que es fluorescente.
El divisor de haz dicroico y los filtros de excitación y emisión se seleccionan de tal manera que la excitación espectral sea compatible con las características de emisión, del fluoróforo utilizado para marcar las muestras y así es como se detecta la distribución de un solo color o fluoróforo en ese momento. Para observar imágenes multicolores, es necesario combinar varias imágenes de un solo color.
Parte del microscopio de fluorescencia.
- Un filtro de excitación.
- Un espejo dicroico o divisor de haz.
- Un filtro de emisiones.
- Una fuente de luz (que puede ser una lámpara de arco de xenón, una lámpara de vapor de mercurio, LED de alta potencia o láseres).
- Un juego de lentes de objetivo.
- Una lente ocular.
- Un escenario para contener la muestra.
- Un detector.
Desventajas de la microscopía de fluorescencia.
El fotoblanqueo que resulta de la iluminación de los fluoróforos puede afectar gravemente el período de tiempo de observación de una muestra mediante microscopía de fluorescencia. Esta técnica usada en células vivas es propensa a aumentar su toxicidad, es decir, molécula fluorescente puede producir agentes reactivos específicos cuando se ilumina, lo que aumenta aún más el efecto fototóxico.
Aunque a través de la fluorescencia se podría observar una muestra de tejido con una tinción de ADN fluorescente. Esto podría mostrar la organización del ADN dentro de las células, pero no puede revelar nada sobre la morfología celular.
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