El microscopio, es un equipo óptico usado en los laboratorios, el mismo, tiene la capacidad de observación a escalas de acercamiento, cumpliendo con el análisis de partículas y la imagen que se obtiene, es realmente una investigación sobre la composición de los objetos.
Con respecto al microscopio de fluorescencia, éste permite que la luz irradie la muestra, para luego desviar la luz más débil emitida de la imagen. Es un equipo óptico convencional, cuenta con un adaptador de fluorescencia, el cual permite realizar la observación óptica de la muestra, tanto convencional como con contraste con fluorescencia.
La imagen captada, es el resultado de la emisión electromagnética expresada por las moléculas que han atraído la excitación primaria, y remitido una luz con mayor longitud de onda. Para dejar pasar sólo la emisión secundaria deseada, se deben colocar filtros apropiados debajo del condensador y encima del objetivo.
Principios del Microscopio de Fluorescencia
El microscopio de fluorescencia, opera con el principio de luminosidad de la fluorescencia. Esta técnica de investigación, se diferencia por el alto nivel de amplitud que se puede lograr con su técnica de análisis. En la fluorescencia, interactúan dos elementos químicos. Estos son:
- Fluorocromo: Es un núcleo que básicamente funciona como colorante, que crea un determinado contraste en la zona de interés de estudio u observación.
- Fluoróforo: es una proteína que contiene características de fluorescencia y se comporta como un tipo de reflector. Ya que la misma, atrae energía con ondas de amplitud corta y las repite con una amplitud de ondas superior a las recibidas.
En este sentido, posee un método de iluminación surtido por un emisor de luz halógeno, el cual pasa por un filtro que normaliza las ondas con la amplitud necesaria para estimular el fluorocromo. El resultado se refleja en un dicroico e incide sobre la muestra.
La estimulación del fluorocromo repite la energía con una amplitud de onda superior a la recibida. Dicha energía lumínica se transmite a través del dicroico. Finalmente pasa por un segundo filtro que selecciona solo las ondas con amplitud emitida por el fluorocromo.
Funciones del Microscopio de Fluorescencia
Primeramente, el microscopio posee un filtro que permite la entrada de la radiación con una longitud de onda específica, que sea la misma que la del material fluorescente. Seguidamente, la radiación, impacta con los átomos en el espécimen, y los electrones son excitados a un nivel de energía mayor. Cuando se relajan a un nivel menor, éstos emiten luz, que permiten ser detectables, y la fluorescencia emitida desde la muestra, es separada de la excitación más brillante con un segundo filtro y se cumple, gracias a la emisión de la luz menor, con una longitud de onda mayor que la utilizada para la iluminación.
Igualmente, permite determinar la distribución de una sola especie de molécula, su cantidad y ubicación en el interior de la célula. Se pueden realizar estudios de localización e interacción, así como observar las concentraciones de iones y procesos intra y extracelulares como la endocitosis y exocitosis.
Asimismo, el microscopio por de fluorescencia, es aplicativo para
- Marcaje de moléculas en células y tejidos para su caracterización e identificación.
- Estudio de células normales y patológicas.
- Estudios inmunológicos.
- Mineralogía.
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