La electroforesis consiste en una técnica que permite la separación de biomoléculas según su movilidad y naturaleza en un campo eléctrico sobre una matriz porosa, es una de las técnicas de biología molecular más utilizadas ampliamente en el laboratorio. Ya que a través de la electroforesis podemos separar fragmentos de ADN y ARN en función de su tamaño, visualizarlos mediante una sencilla tinción, y de esta forma determinar el contenido de ácidos nucleicos de una muestra, pudiendo tener una estimación de su concentración.
En la actualidad la técnica de electroforesis con sus diferentes modificaciones y complementos, es empleada diariamente para separar moléculas de proteínas y ácidos nucleicos y se complementa con una amplia variedad de instrumentos modernos que han aumentado su precisión en la separación de estas biomoléculas, facilitando su manejo.
¿Dónde se realiza la electroforesis?
La técnica de la electroforesis se lleva a cabo en un equipo compuesto de una carga negativa en un extremo y carga positiva en el otro. Al colocar las moléculas cargadas, en este ambiente, las de carga negativa se moverán al extremo positivo, y las cargadas positivamente al otro extremo correspondiente. En la electroforesis se utiliza la diferencia de tamaño y la carga de diversas moléculas en una muestra. La muestra de ADN, ARN o de la proteína que se separará se carga conectado a un gel poroso colocado en un ambiente iónico del almacenador intermedio. En el uso de la carga eléctrica, cada molécula que tiene diversos tamaños y carga se moverá a través del gel a diversas velocidades.
Etapas de la electroforesis
- Obtención de las muestras.
- Preparación del gel
- Preparación de las muestras con el buffer de carga
- Carga de las muestras
- Corrida del gel
- Tinción del gel
- Visualización del gel con luz UV y análisis de resultados
¿Cómo se efectúa la electroforesis en gel?
El gel usado en electroforesis del gel se hace generalmente de agarosa o poliacilamida. Este gel poroso se puede emplear para separar las macromoléculas de diversos tamaños. El gel se sumerge en una solución tampón en una cámara de la electroforesis.
La movilidad electroforética es la velocidad a la cual cada molécula viaja a través del gel y es determinada principal por su carga neta y talla. Las moléculas fuertemente cargadas mueven más rápidamente que débil cargados. Moléculas más pequeñas también se mueven más rápido.
Una vez que se completa la separación, se colorea el gel con un tinte para revelar las bandas de la separación. El bromuro de etidio es un tinte fluorescente de uso general en electroforesis del gel. El gel se empapa en una solución diluida del bromuro de etidio y después se coloca en un transilluminator ULTRAVIOLETA para visualizar las bandas de la separación. Las bandas se examinan y se fotografían inmediatamente.
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