Calibrar los termocicladores es un proceso importante para cuidar los mismos. Es por ello que se deben tener claros todos los puntos de vista para calibrar uno de ellos. Entre estos se encuentran los puntos de vista biológicos moleculares, los cuales se centran en copiar una reacción de PCR a la vista de metrólogos.
Es por ello que la calibración se debe llevar a cabo por personal cualificado, es decir, ninguna persona común y corriente puede intentarlo. Recuerde que para ello se llevan a cabo años de estudios. Los puntos de vista se deben llevar a cabo también en condiciones ambientales definidas que permitan el proceso, como también las circunstancias.
Calibración por imitación del proceso PCR
Si lo tomamos de la perspectiva de un biólogo molecular, esta es la mejor manera para poder calibrar cualquier termociclador siempre y cuando sea el proceso que imite el proceso PCR. El proceso correcto es poner tuvos en pozos de bloque, llenar la mezcla de reacción y colocar los sensores. Luego proceder a cerrar tubos y termocicladores con la tapa térmica para así poder desarrollar el protocolo PCR utilizado en el laboratorio.
Todo este proceso debe estar bajo una temperatura real en un tubo lleno de mezcla de reacción particular. Todo esto debe suceder durante el protocolo PCR llevado a cabo desde un instrumento particular.
Cada combinación de mezcla, tuvo o hasta el protocolo e instrumento de calibración deberán repetirse. Esto hace que la carga de trabajo sea mucho mayor. Por eso los resultados no se pueden ni si quiera comparar entre ellos. Ni si quiera a ningún tipo de norma ni especificación alguna establecida por el fabricante.
Hay que tener presente que esta forma de calibrar literalmente recopilaría muchas variables fuera de control. Por ello, agregar un componente grande de la incertidumbre, es lo mejor para terminar con incertidumbres que oscilen en el rango de más de 2 ºC. Ahora bien, cuando la incertidumbre es de unos 2 º C, y al mismo tiempo la medición de 96 º C, sucede que la temperatura del termociclador puede darse en cualquier rango entre los 94 º C y 98 º C.
Se debe tener presente también que la diferencia de temperatura podría tener repercusiones sobre la inactivación de la Taq polimerasa. Por ello, el nivel de incertidumbre no es para nada agradable en la calibración del termociclador. Sin embargo, si se copia el proceso de la PCR puede llegar a parecer una opción tentadora.
Calibración representativa del proceso
Desde una perspectiva la mejor manera de calibrar un utensilio como el termociclador es mediante la medición representativa y estándar del proceso de PCR. El método permite la calibración de todos los PCR estándares. Se debe tener en cuenta la dinámica y su parte estática durante el proceso de PCR. Esto es importante ya que existen problemas que no se pueden saber a simple vista, o mejor dicho con el control estático de una PCR.
Las temperaturas próximas a la desnaturalización, elongación e hibridación deben ser evaluadas una a una. Los efectos que las mismas pueden tener pueden variar en función a la temperatura.
Calibración conforme a los estándares internacionales
Si se trabaja en el área de meteorología, esta podría ser el área perfecta para calibrar un termociclador. En materia de meteorólogo, una calibración es definida como operaciones necesarias bajo algunas condiciones en específico.
Durante este proceso la trazabilidad se encuentra garantizada al hacer uso de estándares de referencia y expresión de valores que se encargan de calibrar en unidades del SI. Sin embargo, también por aquella incertidumbre calculada del resultado de calibración. Además del hecho de que las mismas calibraciones son sólo hechas por ingenieros especializados en calibración que literalmente estén competentes y cualificados para ejercer dicha acción.
Como saber si una calibración es totalmente segura
- Calibración se debe medir con características térmicas que incluyan un resultado PCR. Entre ellos la exactitud, exceso o alcance, la velocidad fresco calor, tiempo de retención y uniformidad.
- Se debe llevar a cabo un proceso dinámico en vez de un estático.
- Es imprescindible realizar mediante varios canales para excluir efectos de tiempos entre los pozos.
- De suma importancia tener las condiciones ambientales controladas.
- El personal autorizado debe tener la experiencia necesaria para llevar a cabo estas acciones.
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