La electroforesis es una de las principales técnicas de biología molecular, se consideran la técnica más utilizada en los laboratorios en todo lo relacionado con la investigación de ácidos nucleicos. Empleando a la electroforesis podemos separar fragmentos de ADN y ARN en función de su tamaño y carga eléctrica mediante su migración a través de un material poroso (gel), visualizarlos mediante una tinción, y determinar el contenido de ácidos nucleicos o de proteínas en una muestra, teniendo así una estimación de su concentración.
El gel poroso usado en esta técnica actúa como criba molecular que separa las moléculas más grandes de las más pequeñas. Moléculas más pequeñas se mueven más rápidamente a través del gel mientras que los más grandes se dejan detrás. La movilidad de las partículas también es controlada por su carga eléctrica individual.
¿Para qué se utiliza la electroforesis?
La electroforesis tiene muchas aplicaciones prácticas, tales como en la medicina forense para la identificación de personas que puedan haber participado en un delito, el proyecto del genoma humano, la investigación de proteínas y de mutaciones genéticas ya que cuando existen este tipo de alteraciones, las proteínas o cromosomas alterados, son más cortos o más largos apareciendo en un gel de electroforesis de una manera diferente de lo común y pruebas de diagnóstico clínico, permitiendo el diagnóstico oportuno de eneferemedades.
¿Dónde se lleva a cabo la electroforesis?
La electroforesis se lleva a cabo con un equipo llamado sistema de electroforesis, el cual está compuesto de una carga negativa en un extremo y una carga positiva en el otro. Al insertar moléculas cargadas, en este entorno, las negativas se irán a un extremo y las positivas al otro correspondiente, observándose al final un patrón propio de migración que dependerá del tamaño y de la carga de las moléculas.
¿Cómo se lleva a cabo la electroforesis en gel?
El gel usado en electroforesis del gel se fabrica comúnmente de agarosa, que es una substancia gelatinosa extraída de alga marina, o también de poliacrilamida. Este gel poroso se puede utilizar para separar las macromoléculas de muchas diversas tallas. El gel se sumerge en una solución tampón en una cámara de la electroforesis. El Tris-borato-EDTA (TBE) es de uso general como el almacenador intermedio. Su función principal es controlar el pH del sistema.
Posteriormente se cargan las muestras a analizar en pozos minúsculos ubicados en el gel con la ayuda de una pipeta. Una vez que se han cargado los pozos por completo, se aplica una corriente eléctrica de 50-150 V. Esto ocasiona que las moléculas cargadas presentes en la muestra comienzan a emigrar a través del gel hacia los electrodos.
La velocidad a la cual cada molécula viaja a través del gel se llama su movilidad electroforética y es determinada principal por su carga neta y tamaño. Las moléculas fuertemente cargadas se mueven más rápidamente que las débilmente cargadas.
Una vez que la separación es completa, el gel se tiñe con un tinte para revelar las bandas de la separación. Siendo el bromuro de etidio es un tinte fluorescente de uso comun en electroforesis del gel. El gel se empapa en una solución diluida del bromuro de etidio y después se coloca en un transilluminator ULTRAVIOLETA para visualizar las bandas de la separación. Las bandas se examinan o se fotografían inmediatamente para la referencia futura, pues difundirán en el gel en un cierto plazo.
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