Un espectrofotómetro es un equipo utilizado para medir la absorbancia de una muestra, en función de la longitud de onda de una radiación electromagnética. Hay varios tipos de espectrofotómetros. Éstos se agrupan de acuerdo al tipo de muestra analizada; los hay de absorción atómica y de absorción molecular (que comúnmente se conoce como espectrofotómetro UV-VIS).
En general, un espectrofotómetro está compuesto de 4 partes principales: una fuente, un monocromador, un divisor del haz, un área de muestra y un detector. También cuenta con elementos ópticos como lentes o espejos, que transmiten la luz a lo largo de todo el equipo.
La espectroscopia UV-VIS es una técnica analítica que mide la cantidad de longitudes de onda discretas de luz UV o visible que son absorbidas o transmitidas a través de una muestra en comparación con una muestra de referencia o en blanco. Esta propiedad está influenciada por la composición de la muestra, potencialmente proporcionando información sobre lo que hay en la muestra y en qué concentración.
¿Cómo funciona un espectrofotómetro de UV-VIS?
Un espectrofotómetro UV-VIS se basa en el proceso de absorción de la radiación ultravioleta-visible (radiación con longitud de onda comprendida entre los 200 y 780 nm) por una molécula. La absorción de esta radiación causa la promoción de un electrón a un estado excitado. Los electrones que se excitan al absorber radiación de esta frecuencia son los electrones de enlace de las moléculas, por lo que los picos de absorción se pueden correlacionar con los distintos tipos de enlace presentes en el compuesto. Debido a ello, la espectroscopía UV-VIS se utiliza para la identificación de los grupos funcionales presentes en una molécula. Las bandas que aparecen en un espectro UV-VIS son anchas debido a la superposición de transiciones vibracionales y electrónicas.
La luz tiene una cierta cantidad de energía que es inversamente proporcional a su longitud de onda. Por lo tanto, las longitudes de onda más cortas de la luz transportan más energía y las longitudes de onda más largas transportan menos energía. Se necesita una cantidad específica de energía para promover los electrones en una sustancia a una energía más altaestado que podemos detectar como absorción. Los electrones en diferentes entornos de enlace en una sustancia requieren una cantidad específica diferente de energía para promover los electrones a un estado de energía más alto. Es por eso que la absorción de luz ocurre para diferentes longitudes de onda en diferentes sustancias.
¿Cuál es aplicación que tiene un espectrofotómetro UV-VIS?
La espectroscopia ultravioleta-visible (UV-VIS) es una técnica ampliamente utilizada en muchas áreas de la ciencia que van desde el cultivo bacteriano, la identificación de fármacos y las comprobaciones y cuantificación de la pureza del ácido nucleico, hasta el control de calidad en la industria de bebidas y la investigación química.
Es por ello que un espectrofotómetro de UV- VIS es un instrumento usado en el análisis químico que sirve para medir, en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentración o reacciones químicas que se miden en una muestra. Sus aplicaciones pueden ser cualitativas y cuantitativas. También se utiliza en laboratorios de microbiología para la cuantificación de microorganismos.
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