Les acides nucléiques sont des molécules biologiques qui remplissent des fonctions essentielles dans toutes les cellules et tous les virus, parmi lesquels le stockage et l’expression d’informations génétiques. L’acide désoxyribonucléique (ADN) est une molécule qui porte codée l’information génétique qui caractérise les différents êtres vivants. Il permet de réguler le fonctionnement des cellules, de contrôler la transmission de l’information, de coordonner les interactions du fonctionnement cellulaire et tissulaire, de réguler les processus de reproduction et de maintien des caractéristiques propres à chaque espèce, tout cela à travers le code génétique.
Aujourd’hui, l’étude de la variation génétique permet d’expliquer les schémas et les processus évolutifs. En biologie moléculaire, ces études sont abordées par des techniques qui permettent d’analyser en détail la variation dans la molécule de l’ADN. Les PCR (Polymerase Chain Reaction) et le séquençage de l’ADN, tels que les marqueurs moléculaires, sont des segments d’ADN avec ou sans fonctions connues. Les données moléculaires ont permis d’étudier plus précisément les schémas comportementaux, la sélection naturelle, les interactions biologiques, la composition, entre autres.
Au fil du temps, divers protocoles expérimentaux ont été développés pour extraire l’ADN, ainsi que pour assurer l’élimination des inhibiteurs qui rendent difficile l’analyse moléculaire. La préparation de l’échantillon en laboratoire est importante, par conséquent, il convient de suivre des procédures appropriées pour son traitement et son stockage. Des résultats fiables font initialement partie de la capacité à préparer les échantillons en quantités appropriées et à les analyser tout en maintenant la qualité dans toute procédure. Les protocoles traditionnels se composent principalement de cinq étapes: homogénéisation du tissu, lyse cellulaire, séparation des protéines et des lipides, et précipitation.
Après l’isolement de l’ADN, la quantification et l’analyse de la qualité sont nécessaires pour déterminer la quantité approximative d’ADN obtenue. L’extraction peut également être réalisée à l’aide de kits commerciaux. De nombreuses études indépendantes ont montré que le fluoromètre est un mode d’estimation beaucoup plus précis et reproductible de l’acide nucléique. Les procédures fluorométriques sont populaires pour mesurer l’ADN, car elles sont simples et beaucoup plus sensibles que d’autres méthodes.
Pour mesurer l’ADN avec un fluoromètre
- Allumez le fluorimètre quelques minutes avant de l’utiliser.
- Préparer les solutions d’ADN standard (100-5000 ng/ml concentration finale d’ADN) et la solution de l’échantillon d’essai (10-500 ng/ml concentration finale d’ADN).
- Remettre l’instrument à zéro: préparer un essai à blanc en utilisant 2 ml de la solution d’essai d’une forte concentration d’ADN. Insérez le bac dans le puits, fermez le couvercle et appuyez sur la touche correspondante pour afficher « 0 », puis retirez le bac.
- Calibrer l’appareil: verser 2 ml de la solution d’ADN standard dans 2 ml de solution d’essai dans le bac et mélanger. Placez le bac dans le puits, fermez le couvercle et appuyez sur le bouton pour étalonner. Pour un essai de rang inférieur entrez 100, pour l’essai de rang supérieur 1000, puis appuyez sur « Entrée », et après que la valeur entrée est affichée, retirez le bac.
- Remettez l’instrument à zéro: videz, rincez et séchez le seau. Ajoutez 2 ml de la solution d’essai utilisée à l’étape 2, insérez le bac dans le puits, fermez le couvercle et appuyez sur la touche appropriée jusqu’à ce que « 0 » apparaisse. Après que « 0 » apparaisse, puis retirez le bac.
- Mettez le mélange à évaluer dans un seau propre et sec, mélangez bien. Placez le bac dans le puits, fermez et notez la mesure.
Caractéristiques du fluoromètre pour mesurer l’ADN
- Précision: pour la mesure de l’ADN, vous devez mesurer de 1 à 20 μl d’échantillons, même dilués. Vous devez pouvoir absorber tout ce que vous absorbez à 260 nm, y compris l’ADN, l’ARN, les protéines, les nucléotides libres et les sels en excès
- Facile et pratique: vous devez disposer de la technologie appropriée qui facilite le flux de travail, l’exportation des données, leur manipulation facile pour générer des résultats fiables, sensibles et spécifiques.
- Simplicité et vitesse de réponse: vous devez avoir de bonnes performances pour l’analyse de plusieurs échantillons, toujours fournir des résultats.
- Économique : les coûts associés aux réactifs et à l’instrumentation sont faibles par rapport aux autres techniques d’analyse.
Chez Kalstein nous sommes FABRICANTS, nous vous proposons des équipements de haute qualité, le fluoromètre de la série YR412-A, a une source de lumière LED de 260 nm, une plage dynamique linéaire de 0,995, une mesure facile en 3 secondes pour l’ADN, l’ARN et les protéines, avec détecteur de photodiode dont la limite de détection d’ADN la plus basse est 0.5pg / ul. Il possède deux canaux fluorescents pour l’acide nucléique, un adaptateur de tube qPCR de 0,5 ml et un adaptateur de tube qPCR de 0,2 ml. C’est un équipement léger qui offre praticité et polyvalence pour le travail en laboratoire. Pour plus d’informations sur nos produits, nos PRIX, pour l’ACHAT ou la VENTE, visitez notre catalogue ICI