L’électrophorèse est l’une des principales techniques de biologie moléculaire, elles sont considérées comme la technique la plus utilisée dans les laboratoires dans tout ce qui concerne la recherche sur les acides nucléiques. Grâce à l’électrophorèse, nous pouvons séparer des fragments d’ADN et d’ARN en fonction de leur taille et de leur charge électrique grâce à leur migration à travers un matériau poreux (gel), les visualiser par coloration, et déterminer la teneur en acides nucléiques ou en protéines dans un échantillon. , ayant ainsi un estimation de sa concentration.
Le gel poreux utilisé dans cette technique agit comme un tamis moléculaire qui sépare les plus grosses molécules des plus petites. Les petites molécules se déplacent plus rapidement à travers le gel tandis que les plus grosses sont laissées pour compte. La mobilité des particules est également contrôlée par leur charge électrique individuelle.
A quoi sert l’électrophorèse ?
L’électrophorèse a de nombreuses applications pratiques, comme en médecine légale pour l’identification des personnes qui peuvent avoir participé à un crime, le projet du génome humain, l’investigation des protéines et des mutations génétiques, car lorsque ces types d’altérations existent, les protéines ou chromosomes modifiés , sont plus ou moins longs apparaissant sur un gel d’électrophorèse d’une manière différente des tests diagnostiques courants et cliniques, permettant le diagnostic rapide des maladies.
Où est réalisée l’électrophorèse ?
L’électrophorèse est réalisée avec un équipement appelé système d’électrophorèse, composé d’une charge négative à une extrémité et d’une charge positive à l’autre. Lors de l’insertion de molécules chargées, dans cet environnement, les négatives iront à un extrême et les positives à l’autre correspondant, observant éventuellement un schéma de migration approprié qui dépendra de la taille et de la charge des molécules.
Comment se déroule l’électrophorèse sur gel ?
Le gel utilisé en électrophorèse sur gel est généralement fabriqué à partir d’agarose, qui est une substance gélatineuse extraite d’algues, ou encore de polyacrylamide. Ce gel poreux peut être utilisé pour séparer des macromolécules de différentes tailles. Le gel est immergé dans une solution tampon dans une chambre d’électrophorèse. Le tris-borate-EDTA (TBE) est couramment utilisé comme tampon. Sa fonction principale est de contrôler le pH du système.
Par la suite, les échantillons à analyser sont chargés dans de minuscules puits situés dans le gel à l’aide d’une pipette. Une fois que les puits ont été complètement chargés, un courant électrique de 50 à 150 V est appliqué. Les molécules chargées présentes dans l’échantillon commencent alors à migrer à travers le gel vers les électrodes.
La vitesse à laquelle chaque molécule se déplace à travers le gel s’appelle sa mobilité électrophorétique et est principalement déterminée par sa charge nette et sa taille. Les molécules fortement chargées se déplacent plus rapidement que les molécules faiblement chargées.
Une fois la séparation terminée, le gel est coloré avec un colorant pour révéler les bandes de séparation. Étant le bromure d’éthidium, c’est un colorant fluorescent couramment utilisé en électrophorèse sur gel. Le gel est trempé dans une solution diluée de bromure d’éthidium puis placé dans un transilluminateur UV pour visualiser les bandes de séparation. Les bandes sont immédiatement examinées ou photographiées pour référence future, car elles se diffuseront dans le gel au fil du temps.
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